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    公司新聞

    2023-09-06
    學術 | 阿茲夫定聯用多替拉韋鈉在中國健康受試者中的藥代動力學研究
    來源: 作者: 瀏覽次數:510

    阿茲夫定聯用多替拉韋鈉在中國健康受試者中的藥代動力學研究

    Pharmacokinetic study of azvudine in combination with dolutegravir in Chinese healthy subjects


    作者:汪 云1,吳金伶2,馬莎莎2,李 敬1,何斌源2,萬元浩2,李雪珂3,龍正威3,崔 桅1

    ( 1. 天津市人民醫院Ⅰ期臨床試驗研究室,天津 300121; 2. 河南真實生物科技有限公司,河南 平頂山 467036; 3. 上海浦濟醫藥科技有限公司,上海 200131)

    來源:中國臨床藥理學雜志.  第39卷 第13期 2023年7月(總第387期)


         摘要    


    目的 評價健康受試者同時多次口服阿茲夫定(FNC) 和多替拉韋鈉 (DTG) 后,DTG對FNC及FNC對DTG藥代動力學的影響。方法 本研究采用單中心、隨機、開放、三周期、三交叉設計。入組15例受試者,隨機分為3組,每組5例,每組受試者隨機交叉多次服用FNC/DTG/FNC+DTG。采用液相色-串聯質譜法( LC-MS /MS) 測定血漿中FNC和DTG的濃度。計算主要藥代動力學參數并進行統計分析。結果 單用DTG和FNC+DTG聯用時血漿中DTG的藥代動力學參數:Cmax,ss分別為(4621.33±1248.27)和(4728.67±980.58)ng·mL-1,AUC0-t,ss分別為(97530.27±33757.28) 和(101136.63±31214. 96)ng·h·mL-1AUC0-∞,ss分別為(97477.76±31426.55)和(105485.81± 32827.57)ng·h·mL-1; 單用FNC和FNC+DTG聯用時血漿中FNC的藥代動力學參數:Cmax,ss分 別 為 (2.19 ±0.95)和(3.04±1.37)ng·mL-1,AUC0-t,ss分別為(2.72±0.85)和(3.25±1.03)ng·h·mL-1,AUC0-t,ss分別為(3.28±0.76)和(3.37±0.85)ng·h·mL-1。單用DTG和DTG+FNC聯用時血漿中DTG的Cmax,ss、AUC0-t,ssAUC0-∞,ss幾何均數比值分別為103.68%、105.06%和104.38%;單用FNC與DTG+FNC聯用時血漿中FNC的Cmax,ssAUC0-t,ss幾何均數比值分別為137.04% 和120.31%。結論 FNC對DTG的藥代動力學無顯著影響,DTG對FNC的藥代動力學可能有顯著影響。


    關鍵詞: 阿茲夫定; 多替拉韋; 藥代動力學; 液相色譜-串聯質譜法
    DOI10. 13699 /j. cnki. 1001 - 6821. 2023. 13. 024
    中圖分類號: R979 文獻標志碼: A
    文章編號: 1001-6821202313-1938-05


    阿茲夫定( azvudine,FNC) 能抑制人類免疫缺陷病毒( human immunodeficiency virus,HIV) 反轉錄酶與輔助蛋白病毒感染因子( viral infectivity factor,Vif)雙靶點,選擇性進入HIV靶細胞-外周血單核細胞( peripheral blood monouclear cells,PBMCs) 中的 CD4、CD14 細胞抑制病毒復制1。多替拉韋鈉( dolutegra-vir,DTG) 是第二代整合酶抑制藥,世界衛生組織及中國抗病毒指南推薦現為首選一線治療 HIV 抗病毒藥物2。本 試 驗 根 據 FNC 藥品注冊審批意見( 2021S00826) 開展藥物相互作用( drug- drug intera-ction,DDI) 臨床研究,在健康受試者中評價 DTG 和FNC 藥代動力學的相互影響,為臨床合理用藥提供參考。



    材料、對象與方法

    1 材料
          藥品與試劑  阿茲夫定片,規格: 每片3mg,批號: 210201,河南真實生物科技有限公司生產; 多替拉韋鈉片( 商品名: 特威凱? ) ,規格: 每片50mg,批號:C26D,英國 Glaxo Operations UK Ltd 生產; 待測物阿茲夫定,純度: 99.7%,批號: 101517-202101,內標拉米夫定( Lamivudine,3TC) ,純度 99.9% ,批號: 101007-201803,均由中國食品藥品檢定研究院提供; 待測物多替拉韋,純度: 98%,批號: 1-TIM-1-1,加拿大Toronto Research Chemicals 提供; 內標多替拉韋-d5,同位素純度: 99.0% ,批號: 1839-011A1,加拿大 TLCPharmaceutical Standards 提供。
          儀器  ExionLCAC 高效液相色譜儀、TRIPLEQUAD 4500 三重四極桿液質聯用儀,均為美國SCIEX公司產品。

    2 受試者選擇
          本研究經天津市人民醫院醫學倫理委員會批準[倫理批件號: (2021) 年倫審第(57) 號; 藥物臨床試驗登記號: CTR20213190],所有受試者均自愿簽署知情同意書。本研究共入組 15 例受試者,男 11 例,女 4例,平 均 年 齡 (25. 00±6.56) 歲,平均體質量(62.66 ± 6.96) kg,平均身高(167.81±7.71) cm,平均體質量指數( 22. 23±1. 78) kg·m2。

    入選標準 ①年齡 18~45周歲(含臨界值) 的受試者,體質量指數在19~26 kg·m2(含臨界值) ; ②篩選前 2 周內及試驗結束后 3 個月內無生育計劃且同意在試驗期間采取有效的非藥物避孕措施者等。

    排除標準 ①過敏體質或已知對本品或其任何輔料過敏者; ②篩選前 8 周內曾有過失血或獻血≥200 mL; ③篩選前 12 個月內有嗜煙、嗜酒史; ④篩選前12個月內有藥物濫用史者或入組前成癮性物質檢測呈陽性者; ⑤研究者認為不宜參加試驗等。

    3 給藥方案與血樣采集

    本研究采用單中心、隨機、開放、三周期、三交叉試驗設計。試驗共入組15 例受試者,隨機分為3組,每組5例,早上空腹交叉口服 FNC 3 mg 或 DTG 50 mg或聯用 FNC 3 mg + DTG 50 mg,每周期連續口服5 d,3組的 給藥順序分別為FNC+DTG/FNC/DTG、FNC/DTG/FNC+DTG和DTG/FNC+DTG/FNC。周期間的洗脫期為7d。


    每天受試者以溫水 240 mL 送服藥物,服藥前后1h禁水,服藥后約 1、4 和10 h進食標準供應的早餐、午餐和晚餐。每周期的第 3 天和第4天于給藥前(0h) 、第5天(D5) 于給藥前(0h) 和給藥后 0. 25、0. 5、0. 75、1、1. 5、2、3、4、6、8、12、24、48 h 采集上肢靜脈血約 3 mL。在 4 ℃ 條件下以 1700 × g 離心10 min,抽取上層血漿分裝至檢測管及備份管中。血樣采集后 2h 內,將血漿樣本轉移置于-60 ℃冰箱保存,待測。


    4 測定方法與血漿樣品處理

    FNC色譜條件  色譜柱: DIKMA Diamonsil C18柱( 5 μm,100. 0mm×4. 6mm) ; 柱溫: 40℃ ; 流動相:A 為含1mmol·L-1乙酸銨和 0.1% 甲酸的水溶液,B為 0. 1% 甲酸的乙腈-甲醇=4∶1( v/v) 溶液; 進樣量:5.00 μL; 流 速: 0.50 mL·min-1。梯度洗脫條件:0. 00~0. 50 min10% B; 1.70min 20% B; 2. 40 min40% B; 4. 50 ~5. 50 min 95%B; 5. 51 ~6. 50 min 10%B。


    DTG 色譜條件  色譜柱: Agilent ZORBAXEclipse XDB - C18 柱( 5 μm,100. 0 mm × 4. 6 mm) ; 柱溫: 40 ℃ ; 流 動 相: A 為 含 1 mmoL · L1 乙 酸 銨 和0. 1% 甲酸的水溶液,B 為含 0. 1% 甲酸的乙腈溶液;進樣量: 2. 00 μL; 流速: 0. 60 mL·min1。梯度洗脫條件: 0 ~ 0. 50 min 60% B; 1. 80 ~ 2. 80 min 95% B;2. 81 ~ 3. 50 min 60% B。


    質譜條件  電噴霧離子源,正離子模式,多反應監測方式掃描,FNC 碰撞能量為 25 V,拉米夫定碰撞能量為 15 V,DTG 和 DTG - d5 碰撞能量均為 39 V。FNC 離子對為 m /z 287. 20→112. 20,拉米夫定離子對為 m /z 230. 10→112. 10,DTG 離子對為 m /z 420. 30→277. 10,DTG - d5離子對為 m /z 425. 30→277. 10。


    血漿樣品處理 樣品在室溫白光下融化后,渦旋混勻; 移取 50 μL 于 96 孔板中,加入內標溶液20μL和 0. 5% 甲酸的乙腈溶液430μL,充分震蕩約10 min,在 4 ℃條件下以 2 000 × g 離心 10 min。移取上清液250 μL 于新的 96 孔板中,氮氣 40 ℃ 吹干,加入乙腈-水 =1∶4( v/v) 溶液 250 μL,渦旋 10 min,在 4 ℃ 條件下以 2 000 × g 離心5 min,得進樣板 1,用于 FNC 進行液相色譜-串聯質譜法( liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS /MS) 分析。取進樣板1 的溶液 30. 0μL于新的 96 孔板中,加入乙腈-水 =1∶4( v/v) 溶液570μL,充分震蕩約10 min,在 4 ℃條件下以 2000× g 離心5min,得進樣板2,用于DTG進行LC-MS /MS 分析。


    5 方法學考察與評價

    專屬性  在樣品測定條件下,空白血漿樣本處理后,FNC 和內標 3TC 的保留時間為 2. 64min 和 2.36min,DTG 和內標DTG-d5的保留時間均為 1.17min,樣品峰處均無干擾,血漿中內源性物質不干擾測定。色譜圖見圖 1。

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    標準曲線與定量下限 以待測物FNC(DTG) 與內標拉米夫定(DTG-d5) 峰面積的比值為縱坐標(y) ,以血漿中待測物濃度為橫坐標(x)繪制標準曲線,用加權(1/x2) 最小二乘法進行線性回歸。FNC血漿標準曲線的質量濃度均為 0. 20、0. 40、1. 00、5. 00、20. 0、40. 0、80. 0 和 100ng·mL-1,回歸方程為 y =1. 48×102x-0. 20×104(R2 = 0. 9979) ,FNC 的線性范圍 為 0. 20~100 ng · mL-1,定 量 下 限 為 0. 20ng·mL1。DTG 血漿標準曲線 的質量濃度均為10. 0、20. 0、50. 0、250、1000、2000、4 000 和 5 000ng·mL-1,回歸方程為 y = 2.08 × 103x + 3.13 × 104(2= 0. 9980 ) ,DTG 的線性范圍為10. 0~5 000ng·mL-1,定量下限為10. 0ng·mL-1。


    精密度與回收率 配制定量下限、低、中-1、中-2、高5個質量濃度水平的質控樣品(FNC: 0. 20、0. 60、4. 00、50. 0、75. 0ng·mL-1; DTG: 10. 0、30. 0、200、2500、3750ng·mL-1) ,每個質量濃度水平取 6 個樣本分析,連續測定3 個批次,計算批內、批間精密度。同時比較低、中、高3個質量濃度水平經提取與未經提取的待測物 FNC 及 DTG 的峰面積比值,計算回收率。批內批間精密度良好,精密度與回收率結果見表1。

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    基質效應 在低、中-2、高3個質控濃度水平配制一組含基質樣品,即向基質( 6 批不同來源) 的空白提取物中分別加入待測物和內標的溶液,另一組樣品是對應相同濃度水平的待測物和內標的不含基質的溶液樣品(n = 6) 。計算含基質樣品及不含基質溶液樣品中待測物峰面積與內標峰面積的比值,得到 FNC低、中-2、高濃度水平下內標歸一化基質效應因子分別為 0. 97 ± 0. 07、0. 94 ± 0. 07、0. 93 ± 0. 05,變異系數分別為 7. 55% 、7. 12% 、5. 73% 均低于 15. 0% ,無基質效應; 得到 DTG 低、中 - 2、高濃度水平下內標歸一化基質效應因子分別為 0. 96 ± 0. 04、1. 01 ± 0. 02、1. 00± 0. 01,變異系數分別為 3. 81% 、1. 31% 、0. 78% 均低于 15. 0% ,無基質效應。


    穩定性 待測物在室溫白光條件下放置 52 h、待測物凍融 5 次(-60 ~-90 ℃ /室溫、白光) 、待測物凍融 5 次(-10 ~-30 ℃ /室溫、白光) 、待測物在-10 ~-30 ℃儲存 137 d 和-60~-90 ℃ 儲存 137 d、制備后樣品在自動進樣器(6℃) 放置 779 h( FNC) 、774 h(DTG) 以及自動進樣器樣品在自動進樣器(6℃)放置779 h(FNC) 、758 h(DTG) 的進樣重現性,以上條件下均穩定。


    6 統計學處理

    采用 Phoenix WinNonlin( 8. 3 或以上版本) 非房室模型計算 FNC 和 DTG 的藥代動力學參數。對藥代動力學參數Cmax,ss、AUC0-t,ssAUC0-∞,ss 進行對數轉換后進行方差分析,同時計算其幾何均值比(聯用/單用) 的 90% 置信區間; Tmax,ss采用秩和檢驗進行統計學檢驗,評價 FNC 和 DTG 是否存在具有臨床顯著性的藥物相互作用。



    結果

    1 血藥濃度 - 時間曲線
         受試者連續口服 5 d FNC 單藥和 FNC + DTG 聯用后血漿中 FNC 和 DTG 的平均血藥濃度-時間曲線,見圖2。

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    2 藥代動力學參數
         受試者連續 5 d 口服 FNC 或 DTG 或 FNC + DTG后,血漿中 FNC 和 DTG 的主要藥代動力學參數,見表2。

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    3 相互作用評價
         單用 DTG 與 DTG+FNC 聯用后血漿中 DTG 的Cmax,ss、AUC0-t,ssAUC0-∞,ss 幾 何 均 數 比 值 及 其90% 置信區間分別為 103. 68% ( 94. 86% ~113. 31% ) 、105. 06% ( 95. 44% ~115. 65% ) 、104. 38% ( 88. 29% ~ 123. 40% ) ,均 落 在 80% ~125% ;Tmax,ss經非參數法檢驗無顯著性差異( P > 0. 05) 。單用 FNC 與 DTG + FNC 聯用后血漿中FNC 的Cmax,ssAUC0-t,ss幾何均數比值及其90%置信區間分別為137. 04% (103. 63% ~ 181. 23% ) 、120. 31% ( 98. 08% ~ 147. 59% ) ,未完全落在 80. 00%~ 125. 00% 范圍之內; Tmax,ss經非參數法檢驗無顯著性差異(P> 0. 05) 。說明 FNC + DTG 聯用未改變DTG的藥代動力學特征,但會顯著增加 FNC 在體內的暴露量。
    4 安全性評價
         15例受試者均按方案要求完成試驗,進入安全性分析集。單用 FNC 時受試者共發生8例(10例次) 不良事件; 單用DTG 時受試者共發生11例(18例次) 不良事件; 聯用FNC+DTG 時受試者共發生7例(8例次)不良事件。所有不良事件均為1級,均未進行處置和治療,本研究未發生嚴重不良事件及可疑且非預期嚴重不良反應。


    討論

    本研究遵照《藥物相互作用研究技術指導原則(試行)》[3]進行隨機交叉前瞻性臨床試驗,評估健康人體內 FNC 對 DTG 以及 DTG 對 FNC 的藥代動力學影響。本試驗結果顯示: FNC 和 DTG 聯合用藥時血漿中 DTG 的暴露量無顯著變化,而血漿中 FNC 的Cmax,ssAUC0-t,ss分別升高了 37. 04% 和 20. 31% ,提示 DTG 可能會促進 FNC 體內的吸收過程。FNC主要經細胞色素P450 (CYP) 3A、2D6 /2D1、2C9 /2C6 及2C19 /2C11 代謝,以原型及代謝物形式通過腎排泄;而 DTG 主要經尿苷二磷酸 - 葡萄糖醛酸轉移酶 1A1代謝,僅約 10% 經 CYP 代謝[4],這或許是兩藥聯用應用時 FNC 和 DTG 體內藥代動力學過程有差異的原因。



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    參考文獻:

    [1] XU N,YANG J,ZHENG B,et al. The pyrimidine analog FNC po-tently inhibits the replication of multiple enteroviruses[J/OL]. J
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    [2] FRAN?OIS R,HANS J,EUGENIA Q R,et al. Once - daily dolutegravir versus twice - daily taltegravir in antiretroviral - naive adults with HIV - 1 infection ( SPRING - 2 study) : 96 week results from a randomised,double - blind,non - inferiority trial[J]. Lancet Infect Dis,2013,13( 11) : 927 - 935.
    [3] 國家藥品監督管理局 藥品審評中心 . 國家藥監局藥審中心關于發布《藥物相互作用研究技術指導原則( 試行) 》的通告( 2021 年第 4 號) [EB /OL].2021 - 01 - 26 [2023 - 01 - 05]. https: / /www. cde. org. cn /main /news/viewInfoCommon /5a15b727e605482c1cf594c689bb994b.
    [4] CICCULLO A,BALDIN G,BORGHETTI A,et al. Dolutegravir
    plus lamivudine for the treatment of HIV - 1 infection[J]. Expert Rev Anti Infect Ther,2020,18( 4) : 279 - 292.





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